Clonado molecular del genoma del virus de la fiebre aftosa

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A partir de RNA genomico del virus de la fiebre aftosa (VFA), cepa O1 Campos, se sintetizó DNA copia (CDNA) utilizando los metodos de Nucleasa S1 y RNasa H alternativamente. Mediante los procedimientos de "tailing" o "blunt end ligation" dicho cDNA fue ensamblado a plasmidos vect...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor principal: Andino, Raúl Héctor
Otros Autores: Torres, Héctor Norberto
Formato: Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 1986
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n1963_Andino
https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n1963_Andino_oai
Aporte de:
Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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spelling I28-R145-tesis_n1963_Andino_oai2024-09-02 Torres, Héctor Norberto Andino, Raúl Héctor 1986 A partir de RNA genomico del virus de la fiebre aftosa (VFA), cepa O1 Campos, se sintetizó DNA copia (CDNA) utilizando los metodos de Nucleasa S1 y RNasa H alternativamente. Mediante los procedimientos de "tailing" o "blunt end ligation" dicho cDNA fue ensamblado a plasmidos vectores (pBR322 o pAT153 PvuII/8), obteniendose de esta manera una serie de recombinantes los cuales fueron clonados por transformación en Escherichia Coli. Los clones obtenidos fueron seleccionados por hibridización en colonias, utilizando como "probes" RNA viral o determinados fragmentos de cDNA obtenidos previamente. El analisis de los clones seleccionados mediante enzimas de restricción y secuenciación de DNA indicó que la suma de los insertos de 5 clones representa todo el fragmento "L" del RNAgenómico (8000 bases). Posteriormente se obtuvo la secuencia de nucleótidos correspondiente al "gen" de Vp1, con dichos datos de secuencia se dedujó la estructura primaria del polipeptido Vp1. La comparación de la secuencia aminoacídica de la cepa 01 Campos con las secuencias de otras cepas (A10, O1K y C1) mostró la existencia de tres zonas de variabilidad, correspondientes a los residuos aminoacidicos 40-60, 134-160 y 195-213, de las cuales dos se encuentran en regiones hidrofílicas, mientras que la tercera se halla en un dominio hidrfóbico. El fragmento de cDNA correspondiente al "gen" de Vp1 fue subclonado dentro del vector de transposición miniMu denominado PR13, obteniendose el plásmido pmMVp1, el cual permite que el "gen" de Vp1 sea movilizado por transposición de un replicón a otro. Mediante dicha transposición se obtuvieron péptidos de fusión formados por Vp1 y ciertas proteínas de la placa basal del fago T4, los cuales presentan, en forma transitoria, los epitopes inmunogénicosde Vp1 en la superficie celular bacteriana. Fil: Andino, Raúl Héctor. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. application/pdf https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n1963_Andino spa Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar Clonado molecular del genoma del virus de la fiebre aftosa info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n1963_Andino_oai
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