Aplicaci�on de la electroforesis en gel plano de policrilamida al microaislamiento de glicoformas de lipopolisac�aridos con un nivel elevado de homogeneidad

En este trabajo de Tesis se investig�o la aplicabilidad de las t�ecnicas de electroforesis en el gel plano de poliacrilamida (slab-PAGE), tinci�on inversa, extrusi�on y eluci�on pasiva como metodolog�ia para la purificaci�on a escala preparativa de las especies individuales de las mezclas heterog�en...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor principal: Pupo Escalona, Elder
Autor Corporativo: e-libro, Corp
Otros Autores: Hardy Rando, Eugenio (tut.)
Formato: Libro electrónico
Lenguaje:Español
Publicado: Ciudad de La Habana : Editorial Universitaria, 2008.
Materias:
Acceso en línea:https://elibro.net/ereader/ufasta/90108
Aporte de:Registro referencial: Solicitar el recurso aquí
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245 1 0 |a Aplicaci�on de la electroforesis en gel plano de policrilamida al microaislamiento de glicoformas de lipopolisac�aridos con un nivel elevado de homogeneidad  |h [recurso electronico]  |c Elder Pupo Escalona ; tutor, Eugenio Hardy Rando. 
260 |a Ciudad de La Habana :  |b Editorial Universitaria,  |c 2008. 
300 |a [121] p. 
520 |a En este trabajo de Tesis se investig�o la aplicabilidad de las t�ecnicas de electroforesis en el gel plano de poliacrilamida (slab-PAGE), tinci�on inversa, extrusi�on y eluci�on pasiva como metodolog�ia para la purificaci�on a escala preparativa de las especies individuales de las mezclas heterog�eneas de lipopolisac�aridos bacterianos (LPS).Primero se encontr�o que las glicoformas de LPS de mayor masa molecular se pueden recuperar, por difusi�on pasiva a escala anal�itica, en 1 por ciento (p/v) de SDS o DOC o en 5 por ciento (v/v) de trietilamina con una eficiencia de recuperaci�on elevada (90-99 por ciento) y reproducible (CV [6 por ciento). Esto es independiente del tipo de LPS (rugoso, semirugoso, o liso) y del microorganismo de origen (p.ej., Vibrio cholerae O1, Serratia marcescens, Escherichia coli K-235 o E. coli O111:B4). En comparaci�on con los detergentes, la soluci�on de trietilamina permiti�o acortar de forma notable el tiempo de eluci�on (3 h vs. menos de 10 min) de los LPS. A la escala preparativa, las especies individuales de LPS de tipo rugoso (p.ej., V. fischeri cepa HMK, Haemophilus influenzae cepa RM.118 [Rd ], - Pectinatus frisingensis VTT E-82164) o de tipo liso (p.ej., E. coli K-235) se obtuvieron con una pureza elevada (]90 por ciento) y sin ninguna modificaci�on qu�imica apreciable. La eficiencia de recuperaci�on fue menor (3.167.8 por ciento) que la mostrada a escala anal�itica y las cantidades obtenidas estuvieron en el intervalo de 280 ng a 410 g; estas dependieron de la abundancia relativa y el nivel de separaci�on de las bandas de LPS.El an�alisis de las glicoformas micropurificadas de LPS de E. coli K-235 por el ensayo del lisado de amebocito de Limulus (LAL) verific�o que el m�etodo de micropurificaci�on preserv�o la actividad LALen el intervalo entre 4.4 0.5 y 20.2 1.1 unidades de endotoxina (UE)/pmol - de las especies de LPS. Ello fue independiente de la masa molecular (p.ej., 3.58-14.25 kDa), el tipo o la abundancia relativa (p.ej., 0.3-20.2 por ciento) del LPS.Estos resultados demuestran de forma definitiva la factibilidad del uso de las t�ecnicas de slab-PAGE, tinci�on inversa, extrusi�on y eluci�on pasiva, a escala preparativa, como tecnolog�ia de purificaci�on para la obtenci�on de glicoformas de LPS con un nivel elevado de homogeneidad. 
533 |a Recurso electr�onico. Santa Fe, Arg.: e-libro, 2015. Disponible v�ia World Wide Web. El acceso puede estar limitado para las bibliotecas afiliadas a e-libro. 
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