Cultivo de células de la granulosa humanas para el análisis de los efectos del disruptor endocrino di(2-etilhexil) ftalato
La exposición a disruptores endocrinos (DE) representa una preocupación global debido a sus efectos adversos sobre la salud reproductiva. DE cómo el di(2-etilhexil) ftalato (DEHP) se han detectado en el líquido folicular, sugiriendo un posible impacto directo en la función de las células de la gra...
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| Formato: | Artículo revista |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad Nacional Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Secretaria de Ciencia y Tecnología
2025
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| Acceso en línea: | https://revistas.unc.edu.ar/index.php/med/article/view/50485 |
| Aporte de: |
| Sumario: | La exposición a disruptores endocrinos (DE) representa una preocupación global debido a sus efectos adversos sobre la salud reproductiva. DE cómo el di(2-etilhexil) ftalato (DEHP) se han detectado en el líquido folicular, sugiriendo un posible impacto directo en la función de las células de la granulosa humanas (CGH), cruciales para la maduración folicular y la fertilidad femenina. Considerando la complejidad de obtener y mantener cultivos primarios de CGH, se propuso desarrollar y caracterizar un modelo de cultivo de CGH obtenidas de tratamientos de reproducción asistida para el análisis de los efectos del DEHP.
Se obtuvieron CGH de 10 mujeres sometidas a punción ovárica. Las mismas fueron lavadas (DMEM/Ham F-12), centrifugadas a 1000 rpm y sembradas en cubreobjetos de 22 mm sobre placas de 24 wells. Después de 3 días de cultivo fueron estimuladas con DEHP 0 - 1 y 10 nM por 24h, levantadas y procesadas para microscopía óptica y electrónica de transmisión. Se determinó estradiol y progesterona en el medio de cultivo mediante quimioluminiscencia. El análisis estadístico fue descriptivo, cuantificando los efectos observados mediante porcentajes.
El análisis morfológico óptico y electrónico mostró CGH control con una morfología conservada, núcleos ovoides, nucléolos prominentes, gránulos secretorios abundantes esparcidos por el citoplasma y sistema de endomembranas bien desarrollado. La exposición a ambas dosis de DEHP no modificó la morfología celular. Además, se detectó secreción hormonal, cuantificando estradiol (166-405 pg/mL) y progesterona (7.8-267.7 ng/mL) en todas las muestras cultivadas, indicando que las células mantuvieron su función esteroidogénica in vitro. DEHP modificó los niveles de secreción hormonal, observándose un incremento o disminución, sin un patrón claro, posiblemente debido al bajo número muestral.
Los resultados demuestran que el protocolo de cultivo utilizado fue consistente y fiable para mantener las CGH in vitro, preservando sus características morfológicas y funcionales, incluyendo su capacidad esteroidogénica. Aunque la exposición a DEHP no alteró la morfología celular, modificó los niveles secretorios, sin un patrón definido, posiblemente debido al tamaño muestral limitado. Este modelo representaría una herramienta valiosa para futuras investigaciones sobre el impacto de contaminantes sobre la fisiología de las CGH y los mecanismos subyacentes de la infertilidad femenina.
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