Estrategia para la purificación de fibronectina soluble a partir de plasma humano, como ligando para cromatografía de afinidad
El presente trabajo se desarrolló con el objetivo de purificar y caracterizar fibronectina soluble procedente de plasma para su posterior aplicación en la purificación de proteínas de adhesión. Se inmovilizó gelatina en Sefarosa 2BCL como soporte cromatográfico para la preparación de una columna. Se...
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| Autores principales: | , , , , , , , , |
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| Formato: | Articulo |
| Lenguaje: | Inglés |
| Publicado: |
2007
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/7457 http://www.latamjpharm.org/resumenes/26/2/LAJOP_26_2_1_1.pdf |
| Aporte de: |
| Sumario: | El presente trabajo se desarrolló con el objetivo de purificar y caracterizar fibronectina soluble procedente de plasma para su posterior aplicación en la purificación de proteínas de adhesión. Se inmovilizó gelatina en Sefarosa 2BCL como soporte cromatográfico para la preparación de una columna. Se estudiaron diferentes alternativas de elución con arginina 0.5 M y 1M, con glicina -NaCl, acetato de sodio - NaCl y urea - NaCl, lo cual confirmó las ventajas en el uso de la arginina como agente eluyente. Se incorporó una segunda etapa de purificación en una columna de Heparina - Sefarosa 4B CNBr a partir de la que se obtuvo fibronectina con alto grado de pureza en estado nativo, comprobado por SDS-PAGE. La proteína purificada se inmovilizó en una matriz de Sefarosa con un grado de sustitución de 0,98 mg fibronectina/mL de gel lo cual permitió una capacidad de adsorción de gelatina libre con una recuperación de 8 mg (0,64 mg gelatina/mL de gel). La utilización de esta matriz permitirá su aplicación preliminar en la purificación de proteínas de adhesión que podrían ser usadas como antígenos en vacunas contra leptospirosis. |
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