Estudios de identificación y caracterización de agentes contaminantes virales en colonias de cría de ratones
Se conoce ampliamente que la confiabilidad de una colonia de cría de ratones para un determinado experimento puede ser solamente demostrada mediante un comprensivo monitoreo del estado de salud de los animales antes y durante el experimento. En este trabajo se han desarrollado las técnicas de in...
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| Autor principal: | |
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| Otros Autores: | |
| Formato: | tesis doctoral |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
2013
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://repositoriodigital.uns.edu.ar/handle/123456789/2434 |
| Aporte de: |
| Sumario: | Se conoce ampliamente que la confiabilidad de una colonia de cría de
ratones para un determinado experimento puede ser solamente demostrada
mediante un comprensivo monitoreo del estado de salud de los animales antes
y durante el experimento. En este trabajo se han desarrollado las técnicas de
inmunofluorescencia indirecta (IFI) y enzimoinmunoensayo (ELISA) para la
detección de anticuerpos contra el virus Sendai, virus de la hepatitis murina y el
virus diminuto o minuto de ratón en las colonias de cría del ratón, considerados
los agentes virales más prevalentes en las colonias SPF de ratones. Se estudió
la cinética de replicación para cada virus mediante la cosecha de células y
sobrenadantes respectivos, en diferentes días post inoculación (pi).Se obtuvo
una Semilla Maestra y una Semilla de Trabajo para el virus Sendai mediante la
inoculación del virus en huevos embrionados de pollo. La Semilla de Trabajo
sin diluir y en diluciones factor de 10 se utilizó para inmunizar a los ratones con
diferentes esquemas de inoculación. Los sueros y líquidos ascíticos
presentaron títulos de anticuerpos específicos entre 64 y 256, por la inhibición
de hemaglutinación (HAI) y IFI, mientras que los títulos por ELISA estuvieron
entre 6400 y 204800, para las mismas muestras. Para el virus MHV la Semilla
Maestra y la Semilla de Trabajo se obtuvo por inoculación del virus en
monocapas de células L929. Diluciones factor 10 de la cepa viral MHV se
utilizó para inmunizar a los ratones con diferentes esquemas de inoculación.
Los sueros y líquidos ascíticos presentaron títulos de anticuerpos específicos
entre 32 y 2048 por IFI, mientras que los títulos por ELISA estuvieron entre
3200 y 12800 para los sueros y entre 200 y 6400 para los líquidos ascíticos,
para las mismas muestras. Para el virus MVM la Semilla Maestra y la Semilla
de Trabajo se obtuvo por inoculación del virus en monocapas de células L929.
Diluciones factor 10 de la cepa viral MVM y de la ST viral se utilizó para
inmunizar a los ratones con diferentes esquemas de inoculación. Los sueros y
líquidos ascíticos se presentaron títulos de anticuerpos específicos entre 32 y
128 por inmunofluorescencia indirecta (IFI), mientras que los títulos por ELISA
estuvieron entre 1600 y 6400 para los sueros y entre 200 y 800 para los
líquidos ascíticos, para las mismas muestras. El antígeno para la pruebas IFI consistió en células enteras, mientras que para las pruebas de ELISA fue células lisadas por sonicación. Para el virus
Sendai ambos antígenos se obtuvieron por inoculación de 0,1 UHA de la ST en
células LLCMK2 y se cosechó el día 7pi. Para el virus MHV se inoculó ~105
DICT 50 / mL y para el virus MVM ~10 6DICT 50 / mL, en células L929. Las
células fueron procesadas el día 5 y 1 pi respectivamente. Nuestros estudios
muestran que el desarrollo de las pruebas de IFI y ELISA, (complementadas
con la prueba clásica de HAI para el caso del virus Sendai), comprenden una
batería de pruebas innovadoras y confiables para la detección de anticuerpos
contra los virus de Sendai, MHV y MVM en bioteros. Los resultados
presentados revelan que las metodologías desarrolladas en nuestro laboratorio
son herramientas eficaces para el control de la contaminación por los agentes
virales estudiados en colonias de ratones libres de patógenos específicos. Los
estudios presentados podrían considerarse como un punto de partida para el
desarrollo de futuros avances en este campo del conocimiento.
Palabras claves: ratones SPF, virus contaminantes de roedores , enzimo
inmuno análisis (ELISA), inmunofluorescencia indirecta (IFI) |
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