Optimización de condiciones experimentales para la identificación de L. braziliensis analizando diferentes secuencias del genoma
Las leishmaniasis cutánea y mucosa son enfermedades infecciosas causadas por diferentes especies de protozoos del género Leishmania, transmitidas a humanos y animales por vectores de la familia Psychodidae. En América, una de las especies involucradas corresponde al subgénero Viannia especie brazili...
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| Formato: | Reunión |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias
2024
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| Acceso en línea: | http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/55076 |
| Aporte de: |
| Sumario: | Las leishmaniasis cutánea y mucosa son enfermedades infecciosas causadas por diferentes
especies de protozoos del género Leishmania, transmitidas a humanos y animales por vectores de
la familia Psychodidae. En América, una de las especies involucradas corresponde al subgénero
Viannia especie braziliensis. En el Servicio Veterinario de Biología Molecular de la Facultad de
Ciencias Veterinarias (UNNE) se optimizaron las condiciones químicas y térmicas para la reacción
en cadena de la polimerasa (PCR) con la cual se amplificaron dos fragmentos diferentes del
genoma de Leishmania braziliensis. Las reacciones fueron PCR sencillas llevadas a cabo con un
volumen final de 25ul que contuvieron: 1X de Buffer de PCR, 0,2 pM de cada oligonucleótido
cebador (b1/b2 o B1/B2); 0,2mM de una mezcla equimolecular de dNTPs, 1U de Taq ADN
polimerasa y 1,5mM MgCU. En todos los casos se incorporaron controles positivos consistentes
en ADN de L. braziliensis cedidos gentilmente por el Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario
Fatala Chaben” y controles negativos consistentes en agua destilada. Las condiciones térmicas
para la amplificación fueron: desnaturalización inicial: 95°C por 5min, luego 35 ciclos de
desnaturalización a 95°C por 30seg; pegado de primer: 61°C por 60seg; extensión: 72°C por 60seg;
extensión final: 72°C por 10min; incubación: 4°C hasta su utilización. Los productos de
amplificación de ambas reacciones fueron fragmentos de 103pb y 750pb respectivamente. Éstos
fueron separados y visualizados por electroforesis en gel de agarosa 2%, teñidos con bromuro de
etidio y observados por transiluminación UV. Dada la elevada sensibilidad y especificidad de los
métodos moleculares, cuando fueron aplicados a muestras de control positivos ambas dieron
bandas de amplificación detectables del tamaño esperado no observándose bandas en muestras
de ADN de L. chagasi. |
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