Aspergillus sección Fumigati no A. fumigatus : identificación polifásica y desarrollo de un método rápido de identificación molecular
La aspergilosis es una infección fúngica causada por hongos del género Aspergillus. La especie más frecuentemente asociada a infecciones humanas es Aspergillus fumigatus. Sin embargo, la Sección Fumigati hoy contiene al menos 59 especies, muchas de las cuales han sido reportadas como agentes de a...
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| Autor principal: | |
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| Otros Autores: | |
| Formato: | Tesis de maestría |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina
2025
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | http://repositorio.unne.edu.ar/handle/123456789/56526 |
| Aporte de: |
| Sumario: | La aspergilosis es una infección fúngica causada por hongos del género Aspergillus. La
especie más frecuentemente asociada a infecciones humanas es Aspergillus fumigatus.
Sin embargo, la Sección Fumigati hoy contiene al menos 59 especies, muchas de las
cuales han sido reportadas como agentes de aspergilosis que, en algunos casos,
pueden ser refractarias al tratamiento antifúngico.
El objetivo de este trabajo fue conocer las especies de Aspergillus Sección Fumigati
diferentes de A. fumigatus circulantes en Argentina y desarrollar un método rápido de
qPCR-HRM que permita reducir los tiempos de identificación de los aislados
recuperados en cultivo. Para ello, se re-identificaron todos los aislados de A. sección
Fumigati conservados en la colección de cultivos de hongos de interés biomédio del
Departamento Micología (DMic) entre 1984 y 2019. Se estudiaron sus caracteres
morfológicos y su capacidad de crecimiento a 50°C. Todos los aislados que no crecieron
a esa temperatura y/o presentaron morfología aberrante, se identificaron por Multi Locus
Sequence Typing (MLST) con las secuencias de la región ITS1-5.8S-ITS2 (ITS) del
ADNr y los genes -Tubulina (BenA) y Calmodulina (CaM); y se analizaron sus perfiles
de sensibilidad a los antifúngicos. Además, se diseñaron primers específicos para una
región de 58 pb del gen CaM y se analizó un total de 93 muestras de ADN de Aspergillus
de 20 especies diferentes, por qPCR-HRM y se analizaron las temperaturas de melting
(Tm) para la diferenciación entre las especies de la sección Fumigati.
Se analizaron 356 aislados pertenecientes a 315 pacientes, derivadas para su
identificación entre 1984 y 2019. Estos aislados fueron recuperados mayormente de
esputo (37%), lavado broncoalveolar (19%) y biopsia de pulmón (15%). De los 356
aislados, 32 fueron clasificados como A. sección Fumigati no fumigatus: se identificaron
13 aislados (7 pacientes) de A. udagawae, 6 aislados (6 pacientes) de A. lentulus, 2
aislados (2 pacientes) de A. fumigatiaffinis, 2 aislados (2 pacientes) de A. felis, 6 aislados
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(5 pacientes y 1 ambiental) de A. hiratsukae, 2 aislados (1 paciente) de A.
thermomutatus y 1 aislado (clínico-ambiental) de A. turcosus.
Los valores de concentración mínima inhibitoria (CIM) obtenidos con A. felis, A.
thermomutatus y A. turcosus para los nueve antifúngicos evaluados fueron ≤1 mg/L.
Algo similar ocurrió con A. fumigatiaffinis con la excepción de anfotericina B (AB) donde
se obtuvieron valores de CIM de 2 y 4 mg/L para los aislados de esta especie. Por el
contrario, con A. udagawae y A. lentulus se obtuvieron valores de CIM más elevados,
principalmente con AB y los triazoles. Para A. hiratsukae los valores de CIM fueron ≤0,5
mg/L para todos los antifúngicos evaluados a excepción de una cepa que mostró CIM 1
mg/L para isavuconazol. Para A. fumigatus observamos resistencia frente a la
anfotericina B en 3 cepas, mientras que para el resto de los antifúngicos no se
encontraron resistencias, los valores de CIM fueron ≤1 mg/L. Los antifúngicos más
activos fueron itraconazol, voriconazol y las equinocandinas.
El 97% (35/36) de los aislados de A. fumigatus se identificaron correctamente con una
Tm de 78,6± 0,1 °C. Por otro lado, el 100% (42/42) de las demás especies estudiadas
dentro la sección Fumigati se diferenciaron de A. fumigatus correctamente, mostrando
Tm entre 79,1 y 80,5°C.
Según los resultados obtenidos en el presente trabajo, podemos inferir que en Argentina
circulan al menos desde 1998 especies de la sección Fumigati diferentes de A.
fumigatus, en un porcentaje estimado de un 8%. Las especies crípticas detectadas en
orden de frecuencia fueron A. udagawae, A. lentulus, A. hiratsukae, A. fumigatiaffinis, A.
felis, A. thermomutatus y A. turcosus. Este trabajo constituye el reporte de los primeros
casos clínicos en Argentina causados por A. fumigatiaffinis, A. felis y A. thermomutatus,
y el primer reporte de A. turcosus en nuestro país.
Las pruebas de sensibilidad de las especies crípticas frente a los antifúngicos
coincidieron con lo reportado por otros autores. En este estudio se demuestra que los
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perfiles de CIM para todas las cepas DMic de las especies estudiadas de Argentina,
tienen un comportamiento variable similar a lo descripto a nivel mundial, por lo que es
necesario la determinación in vitro de cada aislado.
Este trabajo contiene descripciones taxonómicas y registros fotográficos de macro y
micromorfologia de las especies detectadas en nuestro país. La herramienta qPCRHRM se incorporó a la rutina de laboratorio para la identificación de Aspergillus sección
Fumigati, en combinación con la prueba de crecimiento a 50°C, para reducir costos y
mejorar los tiempos de identificación.
Este trabajo resalta la importancia de realizar estudios multicéntricos para comprender
con precisión la epidemiología de las especies de esta sección a nivel nacional o
regional. |
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