Estudio de la interacción hospedante-patógeno entre plantas y el virus de Mal de Río Cuarto (MRCV)
El virus del Mal de Río Cuarto (MRCV, Fijivirus, Reoviridae) causa la principal enfermedad delmaíz en nuestro país provocando grandes pérdidas económicas. El virus es transmitido porchicharritas de la familia Delphacidae e infecta además diversas gramíneas como trigo, cebada,avena y sorgo, dando lug...
Guardado en:
| Autor principal: | |
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| Formato: | Tesis Doctoral |
| Lenguaje: | Español |
| Publicado: |
2015
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| Materias: | |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5767_Llauger |
| Aporte de: |
| Sumario: | El virus del Mal de Río Cuarto (MRCV, Fijivirus, Reoviridae) causa la principal enfermedad delmaíz en nuestro país provocando grandes pérdidas económicas. El virus es transmitido porchicharritas de la familia Delphacidae e infecta además diversas gramíneas como trigo, cebada,avena y sorgo, dando lugar a síntomas severos. El genoma del MRCV está formado por diezsegmentos de ARN doble cadena (ARNdc) que codifican para trece proteínas. Durante el ciclode infección, el MRCV replica en cuerpos de inclusión citoplasmáticos virales denominadosviroplasmas, y nuestro grupo demostró que están compuestos principalmente por la proteínano estructural P9-1 (Maroniche, 2011). Para otros reovirus se ha demostrado que losviroplasmas contienen además ARN viral y proteínas virales minoritarias junto concomponentes celulares del hospedante. Con el fin de avanzar en la comprensión de las bases moleculares de la enfermedad en primerlugar se analizaron las interacciones de las proteínas del MRCV entre sí utilizando la técnica dedoble híbrido de levaduras (Y2H). Se identificaron cuatro interacciones positivas: P6 con P6 ycon P9-1, P9-1 con P9-1, y P9-2 con P9-2. Se definieron además las regiones de P6 y de P9-1involucradas en las interacciones utilizando mutantes de deleción y se encontró que la regióncentral de P6 con un posible dominio “coiled-coil” es necesaria para la interacción consigomisma y con P9-1, mientras que los últimos 24 residuos de P9-1 intervienen en la formación dedímeros de P9-1. Estos resultados, junto con resultados previos del grupo (Maroniche, 2011),permitieron postular a P6 como componente minoritario del viroplasma e indicaron que laregión C-terminal de P9-1 sería necesaria para la formación del viroplasmas. Adicionalmente se evaluó la interacción de las proteínas virales P6, P7-2, P9-1, P9-2 y P10 conproteínas celulares que son candidatas a cumplir roles relevantes en la interacción MRCVhospedante. Ente otros resultados, se encontró que P7-2 interactúa con la proteína SKP1 (SPhase Kinase Associated Protein 1) componente del complejo E3 ligasa del sistema ubiquitinaproteasoma (UPS). Estos resultados son de gran relevancia ya que sugieren que P7-2 tiene lacapacidad de interferir con el UPS. Para continuar con la caracterización de las proteínas virales P9-1 y P6 e identificar posiblescomponentes celulares asociados con los viroplasmas, se realizaron relevamientos de una biblioteca de ADN copia (ADNc) de hoja de trigo por Y2H. Se encontró que P9-1 es capaz deinteractuar con una proteína con posible función de aldosa 1-epimerasa y otra con posiblefunción de aciltransferasa. Por su parte, P6 mostró interacción con una posible tiorredoxina. Dado que las proteínas identificadas intervienen en el metabolismo de la planta, se postulaque su interacción con proteínas virales podría estar asociada con la generación de síntomas. Finalmente se determinó que tanto P6 como P9-1 contienen potenciales motivos PEST dedegradación vía proteasoma. Se construyeron mutantes sin estos motivos y se observó unincremento en los niveles de acumulación de P6 y P9-1 mutadas en plantas, sugiriendo que los PEST serían funcionales. Si bien aún resta comprender los mecanismos precisos que subyacen a las interaccionesproteína-proteína encontradas en este trabajo de Tesis y sus consecuencias biológicas, estosresultados significan un importante avance en el conocimiento de la función y rol de lasproteínas codificadas por el MRCV, en especial de P6 y P9-1. |
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