Desarrollo y aplicación de primers para detección de rotavirus G3-Equine-Like y caracterización del gen VP7 en niños, Córdoba 2023–2024
Rotavirus es un virus de RNA doble cadena segmentado que codifica múltiples proteínas, incluyendo VP7, que determina el genotipo Gx. Los genotipos humanos comunes incluyen G1-G4, G8, G9 y G12. Desde 2015, una nueva cepa G3 Equine-Like, con un 91% de homología con la cepa equina G3, ha estado circu...
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Rotavirus es un virus de RNA doble cadena segmentado que codifica múltiples proteínas, incluyendo VP7, que determina el genotipo Gx. Los genotipos humanos comunes incluyen G1-G4, G8, G9 y G12. Desde 2015, una nueva cepa G3 Equine-Like, con un 91% de homología con la cepa equina G3, ha estado circulando en varios países, pero no está incluida en los métodos de detección de la OMS. En Argentina, los resultados iniciales de los casos positivos de rotavirus de 2023 indicaron una alta circulación de G1 a pesar del programa de vacunación Rotarix. Sin embargo, la secuenciación reveló que estos amplicones eran G3 Equine-Like, lo que confirmó una genotipificación errónea en el tamaño del amplicón G1 (genotipificación basada en la metodología de la OMS de 2009). El objetivo del estudio fue diseñar un nuevo conjunto de cebadores específico para cepas G3 Equine-Like para la detección de rutina.
Este enfoque se empleó para caracterizar molecularmente las cepas G3 Equine-Like circulantes en Córdoba, Argentina, durante el período 2023-2024. Se utilizaron secuencias de la base de datos del NCBI, publicaciones y VP7 previamente genotipadas de Argentina para diseñar un conjunto de cebadores dirigidos al gen de la proteína VP7. La especificidad del conjunto de cebadores se evaluó frente a otros genotipos de rotavirus, así como con bacterias y virus entéricos.
Los cebadores produjeron una única banda de 230 pb en gel de agarosa sin reactividad cruzada. Las muestras originalmente identificadas como G1 se confirmaron como G3 Equine-Like, lo que enfatiza su papel etiológico clave en los casos de rotavirus. La secuenciación reveló tres cambios de nucleótidos dentro de la región ORF con respecto a las secuencias globales.
La implementación del nuevo conjunto de cebadores demostró ser una herramienta poderosa para la detección rutinaria del rotavirus G3 Equine-Like; sin embargo, el impacto de los cambios de nucleótidos necesita una evaluación más a fondo.
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I10-R327-article-504682025-11-13T12:04:31Z Desarrollo y aplicación de primers para detección de rotavirus G3-Equine-Like y caracterización del gen VP7 en niños, Córdoba 2023–2024 Development and application of primers for the detection of Equine-like G3 rotavirus strains and molecular characterization of the VP7 gene in infected children, Córdoba, 2023–2024 Prez, VE Arteaga, R Cachi, AM Marinzalda, MA Castro, G Barbas, G Masachessi , G Nates, SV rotavirus epidemiology G3-EQUINE-LIKE rotavirus epidemiologia G3-EQUINE-LIKE Rotavirus es un virus de RNA doble cadena segmentado que codifica múltiples proteínas, incluyendo VP7, que determina el genotipo Gx. Los genotipos humanos comunes incluyen G1-G4, G8, G9 y G12. Desde 2015, una nueva cepa G3 Equine-Like, con un 91% de homología con la cepa equina G3, ha estado circulando en varios países, pero no está incluida en los métodos de detección de la OMS. En Argentina, los resultados iniciales de los casos positivos de rotavirus de 2023 indicaron una alta circulación de G1 a pesar del programa de vacunación Rotarix. Sin embargo, la secuenciación reveló que estos amplicones eran G3 Equine-Like, lo que confirmó una genotipificación errónea en el tamaño del amplicón G1 (genotipificación basada en la metodología de la OMS de 2009). El objetivo del estudio fue diseñar un nuevo conjunto de cebadores específico para cepas G3 Equine-Like para la detección de rutina. Este enfoque se empleó para caracterizar molecularmente las cepas G3 Equine-Like circulantes en Córdoba, Argentina, durante el período 2023-2024. Se utilizaron secuencias de la base de datos del NCBI, publicaciones y VP7 previamente genotipadas de Argentina para diseñar un conjunto de cebadores dirigidos al gen de la proteína VP7. La especificidad del conjunto de cebadores se evaluó frente a otros genotipos de rotavirus, así como con bacterias y virus entéricos. Los cebadores produjeron una única banda de 230 pb en gel de agarosa sin reactividad cruzada. Las muestras originalmente identificadas como G1 se confirmaron como G3 Equine-Like, lo que enfatiza su papel etiológico clave en los casos de rotavirus. La secuenciación reveló tres cambios de nucleótidos dentro de la región ORF con respecto a las secuencias globales. La implementación del nuevo conjunto de cebadores demostró ser una herramienta poderosa para la detección rutinaria del rotavirus G3 Equine-Like; sin embargo, el impacto de los cambios de nucleótidos necesita una evaluación más a fondo. Rotavirus is a dsRNA virus with a segmented genome encoding multiple proteins, including VP7, which determines Gx genotype. Common human genotypes include G1-G4, G8, G9, and G12. Since 2015, a new G3 Equine-Like strain, with 91% homology to the equine G3 strain, has been circulating in multiple countries, but it´s not included in the WHO’s detection methods. In Argentina, initial results from the 2023 rotavirus-positive cases indicated high G1 circulation despite the Rotarix vaccination program. However, sequencing revealed these amplicons as G3 Equine-like, confirming mis-genotyping at the G1 amplicon size (genotyping based on the WHO 2009 methodology). The study's objective was to design a novel primer set specific to G3 Equine-Like strains for routine detection. This approach was employed to molecularly characterize the G3 Equine-Like strains circulating in Córdoba, Argentina, during the 2023–2024 pediatric gastroenteritis rotavirus-positive cases. Sequences from NCBI Database, publications, and previously genotyped VP7 from Argentina were used to design a primer set targeting the VP7 gene. The primer set’s specificity was evaluated against other rotavirus genotypes, as well as enteric bacteria and viruses. The primers produced a single 230 bp band on agarose gel with no cross-reactivity. Samples originally identified as G1 were confirmed as G3 Equine-Like, emphasizing its key etiological role in rotavirus cases. Sequencing revealed three nucleotide changes within the ORF region regarding global sequences. The implementation of novel primer set proved to be a powerful tool for routine G3 Equine-Like rotavirus detection, however the impact of nucleotide changes needs further assessment. Universidad Nacional Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Secretaria de Ciencia y Tecnología 2025-11-12 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf https://revistas.unc.edu.ar/index.php/med/article/view/50468 Revista de la Facultad de Ciencias Médicas de Córdoba.; Vol. 82 (2025): Suplemento JIC XXVI Revista de la Facultad de Ciencias Médicas de Córdoba; Vol. 82 (2025): Suplemento JIC XXVI Revista da Faculdade de Ciências Médicas de Córdoba; v. 82 (2025): Suplemento JIC XXVI 1853-0605 0014-6722 spa https://revistas.unc.edu.ar/index.php/med/article/view/50468/50577 Derechos de autor 2025 Universidad Nacional de Córdoba https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0 |