Regulación de la actividad de la PKA por fosforilación de Tpk1p durante la reconfiguración del metabolismo respiratorio al fermentativo e S.cerevisiae

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En S. cerevisiae, la Proteína Quinasa dependiente de cAMP (PKA) controla una muy amplia variedad de procesos. Su activación juega un papel central en el control de la glucólisis y gluconeogénesis, movilización de carbohidratos como trehalosa y glucógeno, represión de genes de resistencia al estrés y...

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Detalles Bibliográficos
Autor principal: Pugliessi, Marcelo
Otros Autores: Moreno de Colonna, Silvia M.
Formato: Tesis de maestría publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2006
Materias:
LEVADURA
AUTOCATALITICO
FOSFORILACION
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4202_Pugliessi
https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n4202_Pugliessi_oai
Aporte de:
Repositorio Digital de la Universidad de Buenos Aires (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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description En S. cerevisiae, la Proteína Quinasa dependiente de cAMP (PKA) controla una muy amplia variedad de procesos. Su activación juega un papel central en el control de la glucólisis y gluconeogénesis, movilización de carbohidratos como trehalosa y glucógeno, represión de genes de resistencia al estrés y control de la proliferación celular. La PKA en mamíferos ha demostrado ser una fosfoproteína con múltiples sitios de fosforilación, que tienen influencia sobre el ensamblado de una enzima activa y/o sus propiedades cinéticas. En S. cerevisiae, la isoforma Tpk1 presenta un cambio en su estado de fosforilación dependiente del estado metabólico de la célula. Las células creciendo en fuentes de carbono no fermentables o en fase estacionaria presentan isoformas de Tpk1 con bajo grado de fosforilación. Cuando estas células reciben un estímulo de glucosa, Tpk1 aumenta su grado de fosforilación, incrementando así su afinidad por el sustrato. La fosforilación reversible de Tpk1, dependiente de la presencia de glucosa, agrega un nuevo nivel de control de la actividad quinasa, además de los clásicos como: regulación por subunidad R, dominios de cAMP y localización. El mecanismo molecular de fosforilación de Tpk1 inducido por glucosa no ha sido caracterizado, como así tampoco si ocurren cambios similares en las otras isoformas Tpk2 y Tpk3. Tampoco se han realizado análisis de los posibles residuos a ser fosforilados en estas proteínas. Con el objetivo de responder a estos interrogantes, hemos realizado experimentos que sugieren que Tpk1 sufre fosforilaciones por un mecanismo autocatalítico e intramolecular. Además, Tpk3 podría estar regulada por modificaciones similares, no sucediendo lo mismo con la isoforma Tpk2. Por último, para un primer abordaje de caracterización de los sitios de fosforilación, realizamos un análisis in silico de Tpk1. De este análisis surgieron péptidos derivados de la secuencia de dicha proteína que fueron utilizados como sustrato en ensayos quinasa que señalan que el residuo Serˆ179 es un candidato a sufrir fosforilación.
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