Roles antagónicos de proteínas celulares durante la infección : viperina y el intercambiador del nucleótido guanosina trifosfato GBF-1 en la multiplicación del arenavirus Junín

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Viperina (VIP) es una proteína celular cuya expresión es inducible por interferón (IFN) y se ha reportado como factor de restricción viral para diversos virus. En el presente trabajo se analizó la acción antiviral de VIP sobre la multiplicación del virus Junín (JUNV). Mediante distintos ensayos se d...

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Autor principal: Morell, María Laura
Otros Autores: García, Cybele Carina
Formato: Tesis doctoral publishedVersion
Lenguaje:Español
Publicado: Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2021
Materias:
JUNV
IFN
VIP
ANTIVIRAL
NUCLEOPROTEINA
GLICOPROTEINA
GBF-1
NUCLEOPROTEIN
GLYCOPROTEIN
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6854_Morell
Aporte de:
Biblioteca Digital - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA) de Universidad de Buenos Aires
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description Viperina (VIP) es una proteína celular cuya expresión es inducible por interferón (IFN) y se ha reportado como factor de restricción viral para diversos virus. En el presente trabajo se analizó la acción antiviral de VIP sobre la multiplicación del virus Junín (JUNV). Mediante distintos ensayos se demostró que el IFN restringe la infección de JUNV en células A549 y Vero. La sobreexpresión de VIP generó una disminución de los niveles virales extra e intracelulares y una reducción del tamaño de los foci virales en cultivos celulares de A549 y Vero. Asimismo, se demostró que la sobreexpresión de VIP durante estadíos intermedios del ciclo de multiplicación viral genera una disminución en los niveles de ARN de la nucleoproteína viral (NP) en células HEK293T. Estos resultados confirmaron la actividad antiviral de VIP sobre JUNV. Adicionalmente, estudiamos las interacciones entre VIP y las proteínas de JUNV: NP y el complejo precursor de la glicoproteína viral (GPC), mediante ensayos de cotransfecciones en células HEK293T. Demostramos la interacción de VIP con NP y con GPC, en este último caso ocurriría a través de la α-hélice localizada en la región N terminal de VIP. Por otro lado, la proteína celular Golgi-specific Brefeldin A-resistance Factor 1 (GBF-1), un intercambiador de nucleótidos de guanina, de expresión constitutiva ha sido reportada como factor proviral para diversos virus con genoma ARN. En el caso de la infección de células HEK293T con JUNV y la inhibición reversible de GBF-1 se observó una disminución en el número de viriones infectivos liberados al medio extracelular. La sobreexpresión de GBF-1 generó el aumento de los niveles de ARN viral. Por último, demostramos la interacción entre GPC y GBF-1. En conjunto, estos resultados demuestran que en la célula existen factores antivirales como VIP y provirales como GBF-1 frente a la infección con JUNV. Dependiendo del tipo de virus y la respuesta a IFN desencadenada por el mismo, sumado a las estrategias de evasión de la respuesta inmune innata viral se determinará la dinámica celular y ésta, a su vez, determinará el resultado de la infección viral: la progresión o la inhibición. Cabe destacar que la demostración del rol de estas dos proteínas ofrece un nuevo blanco para la intervención del ciclo de multiplicación y la búsqueda de agentes quimioterapéuticos específicos.
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La sobreexpresión de VIP generó una disminución de los niveles virales extra e intracelulares y una reducción del tamaño de los foci virales en cultivos celulares de A549 y Vero. Asimismo, se demostró que la sobreexpresión de VIP durante estadíos intermedios del ciclo de multiplicación viral genera una disminución en los niveles de ARN de la nucleoproteína viral (NP) en células HEK293T. Estos resultados confirmaron la actividad antiviral de VIP sobre JUNV. Adicionalmente, estudiamos las interacciones entre VIP y las proteínas de JUNV: NP y el complejo precursor de la glicoproteína viral (GPC), mediante ensayos de cotransfecciones en células HEK293T. Demostramos la interacción de VIP con NP y con GPC, en este último caso ocurriría a través de la α-hélice localizada en la región N terminal de VIP. Por otro lado, la proteína celular Golgi-specific Brefeldin A-resistance Factor 1 (GBF-1), un intercambiador de nucleótidos de guanina, de expresión constitutiva ha sido reportada como factor proviral para diversos virus con genoma ARN. En el caso de la infección de células HEK293T con JUNV y la inhibición reversible de GBF-1 se observó una disminución en el número de viriones infectivos liberados al medio extracelular. La sobreexpresión de GBF-1 generó el aumento de los niveles de ARN viral. Por último, demostramos la interacción entre GPC y GBF-1. En conjunto, estos resultados demuestran que en la célula existen factores antivirales como VIP y provirales como GBF-1 frente a la infección con JUNV. Dependiendo del tipo de virus y la respuesta a IFN desencadenada por el mismo, sumado a las estrategias de evasión de la respuesta inmune innata viral se determinará la dinámica celular y ésta, a su vez, determinará el resultado de la infección viral: la progresión o la inhibición. Cabe destacar que la demostración del rol de estas dos proteínas ofrece un nuevo blanco para la intervención del ciclo de multiplicación y la búsqueda de agentes quimioterapéuticos específicos. Viperin (VIP) is a cellular protein inducible by interferon (IFN) and it has been reported as a viral restriction factor to several viruses. In this work we analyzed VIP antiviral action upon Junín virus (JUNV) multiplication. Through different assays we showed that IFN limits JUNV infection in A549 and Vero cells. VIP overexpression caused a reduction in viral extra and intracellular levels and a reduction of the viral foci size in A549 and Vero cell cultures. Also, we proved that VIP overexpression during late stages of the viral multiplication cycle diminished RNA viral nucleoprotein (NP) levels in HEK293T cells. These results confirmed VIP antiviral activity against JUNV.Additionally, we studied the interactions between VIP and JUNV proteins NP and the viral glycoprotein complex (GPC) through cotransfections assays in HEK293T cells. We showed that VIP interacts with NP and with GPC as well. The region involved in the interaction is in the N terminal region of VIP and it could be VIP α-helix. On the other hand, cellular protein Golgi-specific Brefeldin A-resistance guanine nucleotide exchange Factor 1 (GBF-1), a GTP/GDP exchanger of constitutive expression has been reported as a proviral factor to different RNA viruses. When HEK293T cells were infected and GBF-1 reversibly inhibited, we observed a reduction of infectious viral particles released to the extracellular media. Also, we proved that GBF-1 overexpression led to an increase of NP RNA viral levels. At last, we discovered that GPC and GBF-1 interact. Altogether, these results show that inside cells there are both proviral and antiviral factors, such as VIP and GBF-1, respectively during JUNV infection. The type of virus and the type of IFN response triggered by itself and the innate immune response evasion strategies of the virus will set cellular dynamics and this one will set the outcome of the viral infection: progression or inhibition. It should be highlighted that the roles of these two proteins offer a new target for search and development of specific drug therapy. Fil: Morell, María Laura. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales 2021-03-30 info:eu-repo/semantics/doctoralThesis info:ar-repo/semantics/tesis doctoral info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf spa info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6854_Morell

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